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概览
 | 奥林巴斯cellFRAP专为科研工作者设计，提供高精度灵活的活细胞光操控系统及丰富的图像处理及数据展示方案。cellFRAP通过采用衍射极限尺寸的刺激光斑，确保整个视野内对漂白区域的高效刺激和精确定位。该系统出色的光斑质量不但可以实现刺激区域形状位置的灵活定义，还确保了对漂白区域的精确控制。通过与奥林巴斯IX3开源系统的高度整合，cellFRAP系统可无缝搭载在现有的成像平台上，并与多种显微镜配件兼容联用。通过奥林巴斯cellSens软件的GEM（Graphical Experiment Manager）模块，可轻松实现对cellFRAP的系统设置和实验控制。 |
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高精度的时空分辨率cellFRAP系统具有高精度的空间和时间分辨率，确保了光操控实验数据的可靠性和可重复性。刺激光斑的最小尺寸只受制于衍射极限，保证了对漂白区域的精确控制。通过奥林巴斯特色的实时控制系统（RTC）,cellFRAP系统的光刺激和图像采集之间的时间间隔低至200微秒。因此，该系统可以观察并采集光刺激实验中样品即时响应的重要数据。 |
光刺激和图像采集之间的切换时间低至200微秒 |
衍射极限的激光光斑确保了整个扫描区域内的刺激的高精度和均匀性 |
衍射极限的激光光斑奥林巴斯cellFRAP系统无需移动样品，即可获得优质的光操控实验结果。衍射极限的激光光斑不仅保证了高效的刺激强度，还可实现整个视场范围内漂白区域的灵活定义和精准控制。整套光学系统均经过色差校正，确保能在一个实验中使用多达四种不同谱线的激光，使得光遗传等研究成为可能。 |
准确的实验重复性对于大部分用户来说，准确的实验控制精度和重复精度都非常重要。cellFRAP可通过系统级的高度同步性（~1 微秒时间精度）来满足上述要求。此外，整个实验流程能够以文档形式保存，并可随时调用。 |
直观简洁的系统设置和实验控制cellFRAP系统可与cellSens软件完美整合，操作流程直观简洁。利用软件自带的自动校准功能，可以根据所用的物镜和激光谱线对扫描振镜和成像相机进行优化校准。在cellSens软件的GEM（Graphical Experiment Manager）模块中，可以进行可视化的系统设置和智能化的实验控制，确保了操作灵活性的最大化，并进行高水平的速度性能优化。因此，本系统可轻松实现复杂实验流程的定义及重复，并且所有仪器操作都可自动化实现。 |
使用cellSens的GEM（Graphical Experiment Manager）模块，可以轻松定义和重复复杂的图像采集和数据分析流程 |
您可以通过点、线、面自由定义光漂白区域的形状，并独立设置每个区域的光刺激条件。 |
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交互式实验控制模式cellFRAP系统可根据样品结构精确定义漂白区域。交互式的实验条件设置包括光漂白/刺激区域的自由选取，如不同形状的点、线、面。系统提供两种实验模式可供选择：一种是预先定义感兴趣区域再进行光刺激的实验模式，另一种是交互式的“点击&漂白”实验模式。信号强度随时间变化的曲线可以根据实验需求实时显示。 |
个性化的数据分析方法为了准确分析实验数据，记录的结果中均标注有光操控实验开始和结束的时间节点。cellFrap系统还包含针对FRAP数据的定量分析功能。该功能能够校正背景信号和荧光漂白等导致的结果变化，并快速计算获得生物分子的动力学参数，如恢复速率和生物分子的移动/固定比例等。此外，还可通过记波器功能对用户定义的样品轨迹进行时间轴可视化处理，并可将其数据导出进行深入分析。 |
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时间轴可视化处理，使数据解读及论文表述更直观生动 |
根据用户需求，灵活定制在奥林巴斯IX3系统灵活多变的开源设计理念之下，cellFRAP模块可无缝搭载在现有成像设备之上，与ZDC、环境培养箱、手动或电动载物台及微操系统等配件整合，从而实现光操控系统与其他高端成像技术的联用，如转盘共聚焦、全内反射荧光显微镜等。该系统可配备多达四谱线的光操控激光，为进一步进行光转换、光遗传等复杂研究提供了先决条件。 |
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应用
光活化和光转化许多细胞颗粒移动迅速且不可预测，例如囊泡或病毒等细胞内病原体。因此，具有光活化和光转化特性的荧光分子被用作跟踪动态行为的标记物。例如，可以使用荧光基团，在使用特定波长（例如 PA-GFP、KFP1 和 Kaede）照明时，其光谱特性可以发生可逆或不可逆的变化。特别是，例如，激活的标记分子会跟随蛋白质的踪迹，不需要不断提供额外的荧光基团，就可以提供清晰的信号和最低的本底条件。 |
“一键式漂白”cellSens 软件中的“一键式漂白”功能使用户能够对样品动态变化过程做出反应，以及使用直接鼠标交互对目标进行光操纵。可对多个点进行漂白或激活，并可在漂白过程期间或之后立即采集生成的图像。 |
FRAP漂白后的荧光恢复 (FRAP) 为计算特定分子在细胞特定靶区内的扩散系数提供了一种理想的方法。 这是通过对附着在靶区内特定分子上的荧光基团进行光漂白，然后评估该区域荧光回复（恢复）的动态变化过程实现的。 |
FLIP光漂白中的荧光损失 (FLIP) 有助于研究分子沿细胞膜的运动（侧向膜流畅性）和膜连续性，尤其是膜细胞器。膜或细胞的特定区域被持续漂白，其余区域的荧光动态损失根据其余区域未漂白分子对特定区域内已漂白分子的替代进行测量。 |
FLAP光漂白后荧光定位 (FLAP) 是对 FRAP 的一种巧妙适应，其中受关注的是特定种类分子的动态变化过程。目标分子与两种不同的荧光基团共表达，使得荧光分子的分布和定位重叠。接着将其中一个荧光基团在特定的位置漂白，然后通过比较两个荧光基团的相对和绝对分布来跟踪分子的运动。 |
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