5种用于辅助生殖技术（ART）研究的基本显微镜调整方法

辅助生殖技术(ART)是指用于解决不育症的程序和治疗方法。奥林巴斯提供不同类型的显微镜来支持辅助生殖技术领域的一系列研究应用，如：

• 用于卵母细胞清洗、卵母细胞冷冻和胚胎解冻观察的体视显微镜
• 用于精子观察的正置显微镜
• 支持卵胞浆内单精子注射(ICSI)和胞浆内形态学筛选精子注射(IMSI)及纺锤体观察工作流程的倒置显微镜

针对这些任务适当调整显微镜可以提高观测图像的质量。 为了支持您的工作，本应用说明将分享五种基本的显微镜调整，以帮助优化您的日常观察和工作流程。 请注意，以下程序主要针对常用的奥林巴斯倒置显微镜和体视显微镜。
 

1. 光轴调整

要在IX73或IX83倒置显微镜上调整光轴，请执行以下步骤：

1. 将聚光镜的孔径光阑控制杆移动到最左侧位置，以打开光阑。
2. 将照明柱的视场光阑控制杆移动到最左侧位置，以打开光阑。
3. 使用10倍物镜聚焦标本。
4. 将视场光阑控制杆略微向右移动，以缩小视场光阑，使其图像位于视野中。 （图2a显示了通过目镜看到的视图。）
5. 旋转聚光镜手柄，使聚光镜上下移动，以聚焦视场光阑的图像。
   确保您能看清楚多边形（图2b）。
6. 将附带的两个六角螺丝刀插入调节螺钉孔。 转动聚光镜的调中螺钉，将其移至视野中心（图2c）。
7. 打开视场光阑控制杆，直到图像刚好位于视野之外。

我们使用CM20系统测试了是否能够以三维方式观察在人工基底膜中分化和生长的肝脏类器官的培养过程。^*1

图1：装有IX2-MLWCD手动聚光镜的IX73显微镜

2. 瞳间距调节

瞳间距调节将目镜之间的宽度调整为观察者眼睛的宽度，以便进行清晰的观察。 适当调整瞳间距可以让您通过目镜看到一张清晰的图像。 如果您通过目镜看到两幅图像，则瞳间距必须进行调节。

要在IX73或IX83倒置显微镜或者SZX10或SZX16体视显微镜上调节瞳间距，请执行以下步骤：

1. 在正确的眼点位置观看目镜（图3），同时使眼睛注视在标本上。 为了舒适地进行观察，您的眼睛需要与目镜保持一定距离。 戴眼镜时，确保眼镜接触到目镜的玻璃。 如果裸眼观察，将眼睛放在与目镜相连的橡胶眼杯上。

   
   图3

2. 水平加宽或缩窄左右目镜的眼宽，使左右视野在中间显示为单个图像。 凝视该单个图像时拉近您的眼睛与目镜的距离。 重复此调节，以便右眼、左眼和双眼都可以看到相同的视野。

   
   图4

3. 屈光度调节

屈光度调节可校正左右视野之间的差异，并尽量减少因切换物镜而产生的焦点位移。 由于个人的屈光度不同，每个用户都需要进行屈光度调节。

要在IX73或IX83倒置显微镜上调节屈光度，请执行以下步骤：

1. 将两侧屈光度调节环的刻度设置为“0”位置。

   
   图5

2. 将低倍率（例如10倍）物镜移入光路。 用右眼观察右目镜，用粗调手柄聚焦标本。
3. 再次将低倍率（例如10倍）物镜移入光路。用右眼观察标本时，仅旋转右侧的屈光度调节环（观察筒侧：图6a中的锯齿状部分）以聚焦标本。

   
   图6

4. 用左眼观察左目镜，仅旋转左侧（目镜侧）的屈光度调节环（图6b）以聚焦标本。

4. 物镜上的校正环调节

由于标本容器底面的影响，观测图像中可能会出现球面像差（光线不能在光轴上聚集到一点的一种光学误差）。 这可能会导致图像变得不清晰。 物镜上校正环的作用是减少这种像差。

图7

奥林巴斯物镜的光学设计适用于厚度为1.5 mm的容器，该厚度为盖玻片的典型厚度。 这意味着，当物镜的校正环设置为1.5时，加热板和容器的总底部厚度必须为1.5 mm。 这个总厚度能让您最大限度地利用您的物镜。

要满足这些特定的厚度要求，请仔细选择与标本容器兼容的加热板。 对于厚度为1 mm的塑料培养皿，选择厚度为0.5 mm的加热板。 对于厚度为0.17 mm的玻璃底培养皿，选择厚度为1.3 mm的加热板。

您还可以根据加热板厚度和容器厚度的总厚度（使用IX73倒置显微镜时）设置物镜的校正环。 以下是两个示例：

示例1：当加热板厚度为0.5 mm，玻璃底培养皿厚度为0.17 mm时，将厚度相加(0.5 + 0.17 mm = 0.67 mm)，并将校正环调整至0.67 mm的位置（图8）。

图8

示例2：当加热板厚度为0.5 mm，塑料培养皿厚度为1 mm时，将厚度相加(0.5 + 1 mm = 1.5 mm)，并将校正环调整至1.5 mm的位置（图9）。

图9

5. 变焦齐焦性调节

变焦齐焦性调节功能可防止在低倍率和高倍率之间切换时出现失焦问题。 如果调节正确，您就不需要在每次工作（比如卵母细胞清洗）期间切换放大倍率时调节焦点。 这可以提高工作效率。

要在SZX10或SZX16体视显微镜上调节变焦焦点，请执行以下步骤：

1. 将变焦手柄设置为最小放大倍率一侧，并使用粗调手柄对焦。
2. 逐渐将变焦手柄移到高放大倍率一侧，并用细调手柄调焦，然后将其提升到最大放大倍率并对焦。
3. 让变焦手柄回到低放大倍率一侧。 如果视野失焦，旋转左右目镜的屈光度调节环以对焦。
4. 再次将变焦手柄设置为最大放大倍率一侧，并检查视野是否聚焦。 如果失焦，重复第二步和第三步。 当最小和最大放大倍率都对准焦点时，变焦焦点调节完成。
5. 调整眼宽，使两只眼睛都能看到单一视野。

   
   图10