对药物的反应-3D细胞培养的内部和外部

通过细胞成像评估药物对3D细胞培养的影响。
研究了药物对3D细胞培养物（如微球）内部和外部影响的差异。

目的

诸如微球的3D细胞培养近期被用于研究细胞对药物的反应。但是，3D细胞培养物内部和外部的响应差异尚未经过考虑。本研究中利用共聚焦显微镜观察微球深层研究这一差异。

样品的制备

Fucci是一种采用双色方案的细胞周期指示剂。将由表达Fucci的转基因HT-29细胞组成的微球暴露于10 nM的顺铂中。孵育96小时后，从细胞培养物中除去含有顺铂的培养基，将其固定在4％福尔马林中，并用透明化试剂处理。

结论
荧光图像的采集和分析

在从表面到深度150μm的范围内每5μm厚度对微球的共聚焦荧光图像进行一次采集。使用分析软件分析每层中红色（G0和G1相）与绿色（S、G2和M相）的比率。在没有顺铂的情况下，内部和外部之间的红色/绿色比率没有显著差异（图1）。存在浓度10 nM的顺铂情况下下，红色/绿色比率随与表面距离的增加而增加（图2和3）。

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