体视显微镜是一种用于对标本进行宏观和立体观测的实用工具。这类显微镜为每只眼睛提供了单独的观察光路,从而让标本具备一定的深度,看起来就像您用眼睛直接对其进行观察一样立体。 体视显微镜主要有两种照明方式:反射光照明和透射光照明。
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标本的类型决定了哪种照明方式的观测效果最佳。在很多情况下,您可能需要使用多种方法。每种照明方式还包含以下几种观察方法,如表1所示。
表1 –体视显微镜的常用观察方法
观察方法 | |
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反射光照明 |
倾斜
同轴 偏光 荧光 |
透射光照明 |
明场
暗场 斜照明 偏光 |
今天,我将介绍一下透射光照明,以便让您进一步了解其观察方法。
4种透射光照明的常用观察方法
我们已经介绍了透射光照明最常用的观察方法,下面让我们进一步探索其特点和常见应用。
明场:明场透射照明是目前使用最广泛的观察方法。透射光直接照射在标本下方。当光线透过标本时,透射光通过标本密度较大区域会导致强度的衰减,从而形成成像对比度。如果标本未染色且本身没有颜色,这种观测方法只能获得少量信息。在这种情况下,使用其他观察方法可能会是更好的选择。
暗场:暗场透射照明特别适合未染色和透明的标本。该条件下穿过标本中心的光线会被遮挡,只有来自各方位角的倾斜光线会照射到标本上。这些倾斜光线由于光学不连续性而发生衍射、反射和/或折射。最终效果就是在黑色背景上呈现出明亮的标本图像。
斜照明:倾斜透射照明也适用于未染色和透明的标本。此方法让您可以通过调整光线的角度获得一定的对比度。其对比度高于明场成像,但低于暗场成像。使用斜照明的方法,您可以轻松通过图像中标本外观的变化找到适当的照明角度。
偏光照明:偏振光透射照明适用于具有多种折射率的各向异性标本(双折射标本)。由于双折射标本必须放置在起偏器和检偏器之间,因此偏光照明需要额外的部件。平面偏振光与双折射标本的相互作用,这种相互作用将产生两个在相互垂平面上偏振的独立波分量,并产生对比度。
使用明场观察方法得到的斑马鱼图像
使用斜照明(左)和暗场(右)观察方法得到的青鳉图像
扩大观察范围
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