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概述
洞见标本深度的细节专为生物标本深层成像而设计的FVMPE-RS多光子显微镜有助于发现细胞在活组织内的功能和相互作用。 This product has been discontinued, check out our current product |
高灵敏度、高分辨率的深层多光子成像FVMPE-RS多光子显微镜采用了先进技术和光学设计,可提高深度成像灵敏度和分辨率。
| 使用具有自动球差校正功能的TruResolution物镜捕捉的活体小鼠大脑(Thy1-YFP-H小鼠,感觉皮层)的3D重建图像(左),以及在约600μm深度图像的最大亮度投影。不使用(右上)和使用(右下)自动球差校正功能采集的图像。 图像采集于RIKEN BSI-Olympus合作中心,并由Hiromu Monai博士、Hajime Hirase博士和Atsushi Miyawaki博士提供。 |
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斑马鱼胚胎的血液流动。
| 适用于快速动态细胞内生物过程的高速成像高速共振扫描和高分辨率扫描为标准配置。
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光谱覆盖范围更广的多波长激发FVMPE-RS成像平台可配置双光谱线红外激光或两套独立红外脉冲激光器,以实现多通道多光子激发成像。
| 猪脂肪组织的三次谐波成像。使用1250 nm的飞秒激光照射未标记的猪脂肪组织,检测到胶原纤维的625 nm二次谐波,以及脂质界面的416 nm三次谐波。 |
高端应用的选配功能FVMPE-RS多光子显微镜可根据您的研究需求,轻松升级不同功能模块。 选配功能包括:
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直观清晰的软件布局,专为多光子成像优化可自定义软件界面和布局,帮助您提高工作效率:
在线分析和图像处理(包括光谱拆分和3D渲染) |
可选三个显微镜镜架 |
正置显微镜系统—适用于进行在体和体外实验的多光子显微镜正置大空间镜架和大行程焦距可容纳从组织切片到活体小鼠和其他小型动物的各种标本。 | 龙门型显微镜系统—适用于需要更大空间的活体观察物镜到底板间355毫米高度便于容纳跑球、气浮笼等设备,适用于清醒小鼠配合行为学实验的在体观察。 | 倒置显微镜系统—适用于3D细胞和组织培养的体外观察倒置镜架可为厚活体标本(尤其是组织培养以及3D细胞球和细胞培养的类器官)的时间序列成像提供稳定的平台。该配置也适用于通过可视化窗口对小型动物器官和组织进行活体成像。 |
应用技术
深度成像可获得高分辨率的图像使用TruResolution物镜对厚样品进行深层成像能够获得更出色的分辨率和对比度。 这些物镜配有自动校正环,能够在保持准确聚焦位置的同时进行球差动态补偿。动态补偿可在立体图像的各个平面上进行自动调整,进而获得更清晰、更明亮的深层3D图像。 | Related Videos |
利用四轴自动激光对准实现用户友好的精准成像在常规系统中,因波长调谐、温度波动和其他腔长漂移源引起的激光束漂移会导致激发光束错位。 FVMPE-RS多光子显微镜即便在发生激光漂移情况下也能保持激发光束精确四轴激光对准,从而简化了系统维护。通过自动调整光束位置和倾斜角度,实现更高的激光功率和更准确的像素配准。 如果您的系统配有两条激发光谱线,则该功能可确保光束之间的对准,从而消除通道之间的定位差异。 |
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每秒高达438帧的高速扫描可在一套系统中配置快速共振扫描振镜和线性常规扫描振镜,以实现高速和高分辨率成像。通过在全视场(FN 18)以512×32像素实现高达438 fps的采集速率,以512×512像素实现高达30 fps的采集速率,您可以:
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高效激光传输镀银扫描振镜有助于向样品输送更强激光,从而获得更明亮的图像。 与传统的镀铝振镜相比,更高的近红外范围反射率对于在体深层实验特别有利。 |
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高灵敏检测光路可最大限度发挥荧光成像性能利用高灵敏度的磷化砷化镓(GaAsP)光电倍增管(PMT)检测器从微弱荧光中捕捉高信噪比(SNR)图像。与标准多碱(MA)光电倍增管相比,其具有更高的量子效率,并且使用Peliter固体制冷,既能减少风扇冷却带来的振动,还能更进一步提高信噪比。 如果您使用明亮发光的样品,还可以配合多碱检测器使用,以获得更宽动态范围。 为了获得更高光效率,检测路径采用了大靶面光学器件,能够更好地捕获散射荧光光子,并充分利用多光子物镜的宽视场检测能力。 |
专为深度成像设计的多光子物镜
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利用深焦成像模式最大限度提高信号强度深焦成像模式可根据激光散射情况调整激光光束的直径。对于激光散射严重的活体标本,深焦成像模式将会收紧光束以便让更多激发光子到达样品更深位置,从而获得更明亮的图像。 |
独立的光刺激控制为了进行精确的微秒级别的光刺激和光漂白实验,需要添加:
可自定义任意感兴趣的刺激区域(ROI)。在需要更高速度情况下,也可使用随机多点时序刺激。 在两条红外成像谱线的系统上,配备SIM扫描振镜可实现多光子成像和同步刺激。 |
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为电生理和光遗传学设定的微秒级精确控制硬件时序管理功能具备微秒级重复精度,可以精确控制外触发和点刺激。 刺激和成像可以在空间和时间上实现精确同步,进而精准捕获动态过程中的快速反应。对于电生理学和光遗传学而言,意味着能够区分同步刺激响应和异步刺激响应之间的差异。 对于长时间的采集以及需要在成像任务之间进行切换的复杂程序实验,时序管理器软件模块可确保毫秒级精度,在体内和体外实验中提供高质量数据。 |
解决方案
使用ANALOG单元同步电生理数据和激光刺激支持电生理实验模拟信号输入和TTL I/O 信号。ANALOG单元将外部电压信号记录为图像数据。将光刺激过程中用膜片钳测量得到的电信号与采集到的图像同步,并以光强度伪彩图层的方式展示。 多点和绘图软件模块(MMASW)可以对多个任意选择的点或矩形感兴趣区域(ROI)中的点进行精确光刺激,以进行绘图扫描,同时记录来自膜片钳系统的电压信号。
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*ChR2和NpHR相结合的实验中,使用配备多个激光器的SIM扫描振镜控制多点激光逐点扫描。 |
创建3D刺激反应图谱在测量对光刺激的电生理反应时,专用地图/绘图扫描可利用伪随机时序获得更精确的空间反应图。电膜片钳电记录和钙离子或电压指示器的荧光信号可在高分辨率图像上叠加。可使用强度阈值筛选反应最活跃的区域,并对这个区域设置步高速扫描。可使用选配压电Z轴获取3D反应图。 |
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实现大视场和高分辨率的结合多位点延时(MATL)功能可实现在更高分辨率和更宽视野下查看标本全局:
| 图片数据由苏黎世大学显微镜和图像分析中心Urs Ziegler和Jose Maria Mateos提供。小鼠L15谱系由巴塞尔生物医学研究所的Pico Caroni提供。 |
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软件
精确的实验操控时序管理器让协作实验变得更加轻松。您可以按精确的时间轻松组织和加快复杂方案,其中包括:
可以保存和重新加载实验设置,确保实验重复性。 |
光谱拆分可解决通道串色问题多色标记的生物荧光样品一旦出现光谱重叠或串色,很容易影响分析结果。现在可以利用盲拆算法或先前保存的多通道配置文件的光谱反卷积功能分离叠加的光谱通道。对于这种情况,可以通过盲拆分算法,或基于提前保存的多通道文件进行光谱拆分。除了图像后处理,在预览的同时也能进行实时光谱拆分。 |
常规模式红色和绿色荧光的光谱叠加会导致通道之间发生荧光串扰。 | 实时拆分模式实时拆分模式可在图像采集同时进行光谱拆分,从而更出色地分离不同的荧光团。 |
3D渲染大量Z-stack数据可渲染为3D模式显示。可以将重要画面登记为关键帧,从而轻松创建可以缩放和过渡到其他角度的3D动画视图。 |
使用德克萨斯红标记的小鼠脑部血管的4mm深度 三维图像
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(左)以低激光功率(0.05%,488 nm)采集的30 fps原始数据。
| 滚动平均处理实现快速降噪在低激光功率下进行高速扫描可以避免光毒性但会降低信噪比。利用滚动平均后期处理可以提高延时图像的质量,同时保持时间比例并保留原始数据。 |
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从宏观到微观的观察使用高数值孔径(NA)物镜、电动载物台和Olympus软件实现全景多视野成像:
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深层亮度补偿观察较厚标本时,随着焦点变深,图像会变暗。但是通过Bright Z深层亮度补偿,可以连续调整检测器灵敏度和激光功率,从而保持亮度的一致性。此功能可以作为同样可自动对球差进行深度补偿的动态TruResolution物镜的补充。 |
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扩展分析功能FVMPE-RS成像平台软件与奥林巴斯cellSens图像分析软件整合后可以扩展系统的分析能力。 选配功能包括:
还可选配NoviSight 3D细胞分析软件。 |
技术参数
FLUOVIEW FVMPE-RS |
单激光系统 | 双谱线系统 | 双激光系统 | ||
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模块 | 用于多光子激发的带负色散补偿红外脉冲激光器 | 光谱物理产品: MAITAI HPDS-OL: 690 nm–1040 nm MAITAI eHPDS-OL: 690 nm–1040 nm INSIGHT X3-OL: 690 nm-1300 nm INSIGHT X3 DUAL/DUALC-OL: 680 nm–1300 nm + 1045 nm 相干产品: Chameleon Vision I Olympus: 680 nm-1080 nm Chameleon Vision II Olympus: 680 nm-1080 nm Chameleon Vision S Olympus: 690 nm-1050 nm | ||
主激光 |
MAITAI HPDS-OL
MAITAI eHPDS-OL INSIGHT X3-OL Chameleon Vision I Olympus Chameleon Vision II Olympus Chameleon Vision S Olympus |
INSIGHT X3 DUAL-OL
INSIGHT X3 DUALC-OL |
MAITAI HPDS-OL
MAITAI eHPDS-OL INSIGHT X3-OL Chameleon Vision I Olympus Chameleon Vision II Olympus Chameleon Vision S Olympus | |
副激光:
用作第二条成像激光谱线或配合SIM扫描单元用于同步的光刺激 | - |
1045 nm固定谱线,来自
INSIGHT X3 DUAL /DUALC-OL |
MAITAI HPDS-OL
MAITAI eHPDS-OL Chameleon Vision I Olympus Chameleon Vision II Olympus Chameleon Vision S Olympus | |
自动红外导入光路 |
通过AOM调节
(0%–100%,步进0.1%) 包括全自动扩束镜, XY移动和XY倾斜角度校准。 (4轴自动对准光路) 直接耦合到激光扫描单元。 |
2套AOM调节(0%–100%,步进0.1%)
包括2套全自动扩束镜、XY移动和两个轴向角度校准。 (4轴自动对准光路) 直接耦合到激光扫描单元。 | ||
红外激光整合光路 | - | 电动的光路切换,使用DM900、DM1000R、DM1100整合两个红外波段用于成像 | ||
选配可见光波段激光用于光刺激 | 配有AOTF的405 nm/50 mW、458 nm/20 mW、588 nm/20 mW激光光源。0%–100%,步进0.1%,上升时间<2μs | |||
扫描单元 | 扫描方式 | 镀银扫描振镜,一组为高分辨扫描振镜,另一组为共振扫描振镜 | ||
扫描速度 |
常规扫描振镜(常规成像):512 × 512,时间1.1 s–264 s, 像素停留时间: 2 μs–1000 μs
共振扫描振镜(高速成像):512X 512 30帧/秒 @ FN 18,512X32 438帧/秒 | |||
扫描模式 | XY,XYZ,XYT,XYZT,free line,XZ,XT,XZT,PointT | |||
常规扫描振镜
(常规成像) |
常规扫描振镜ROI扫描:矩形,椭圆,多边形,任意形状,线,随意线或点
光学放大:1.0x–50.0x,步进0.01x,支持0°–360°旋转和平移 扫描视场数:18 扫描分辨率:64 × 64–4096 × 4096 | |||
共振扫描振镜
(高速成像) |
共振ROI扫描:矩形,线
光学放大:1.0x–8.0x,步进0.01x 扫描视场数:18 扫描分辨率: 512 × 512 | |||
光学镀膜 | 特殊镀膜,透过率范围可达到红外区的1600nm | |||
多光子NDD检测器 |
反射光检测器:2或4个通道配置:2个常规PMT,4个常规PMT或2个常规PMT + 2个制冷的磷砷化镓光电倍增管检测器(GaAsP-PMT)
透射荧光检测器:2个常规PMT和高NA聚光镜 | |||
透射光检测器 | 外接透射光检测PMT和100W卤素灯,电动开关,通过光纤接到显微镜上 | |||
Z轴驱动 |
电动,最小步进0.01μm
选配:高刚性piezo物镜适配器*1 | |||
可选配同步刺激扫描单元 |
高精度同步刺激扫描单元,包括一组常规扫描振镜、可见光波段和红外波段激光引入口。
ROI扫描:矩形、椭圆、多边形、任意形状、线、随意线和点。 | |||
可选配的模拟和数字信号输入/输出盒 | 4个模拟信号输入通道,6个数字TTL触发输入通道,5个数字TTL触发输出通道。扫描单元时间输出通道 | |||
操作环境 | 室温:20°C–25°C,湿度:25°C时75%或更低,需要连续(24小时)供电 | |||
防震台尺寸 |
1500 mm × 1650* mm
*倒置显微镜为1500 mm × 1800 mm |
1500 mm × 1650* mm
*倒置显微镜为1500 mm × 1800 mm | 1500 mm × 2000 mm | |
软件 | 基本功能 |
适合暗室的图形用户界面设计。用户可自由排列界面。
采集参数重新调用功能。硬盘录入功能,每一个Z平面,都可以调激光强度和HV值。 配有ɑ混合、最大强度投影、等值面渲染的Z-stack。 | ||
红外激光控制 | 完全集成的红外激光波长控制和深焦模式 | |||
可选配的电动载物台软件 |
XY电动载物台控制地图图像采集,轻松找到目标位置。平铺采集和软件图像拼接。
定义多点延时成像。 | |||
可选配的绘图和多点刺激软件 |
多点刺激和数据采集软件。绘制多点刺激后产生反应的位置。
根据信号特点筛选位点。多点刺激。单次或重复刺激。 可以选择每一个点的刺激波长。 | |||
可选配的时序管理器 |
先进的可编程软件可定义多个成像/刺激任务,并由硬件时序管理器执行。
任务之间的最小间隔时间为100 ms。 | |||
选配自动补偿软件 |
自动球差补偿软件模块。
具有自动球差补偿功能物镜的控制。通过自动调整电动校正环在特定观察深度找到最佳位置。 随着Z轴移动自动调整校正环。 |
*1在某些地区不可用。 |
TruResolution物镜 |
FV30-AC10SV | FV30-AC25W | |
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放大倍率 | 10 | 25 |
NA | 0.6 | 1.05 |
W.D. | 8 mm | 2 mm |
盖玻片厚度 | 0 mm-0.23 mm | 0 mm-0.23 mm |
浸液 | SCALEVIEW-A2(水、硅油和普通荧光镜油均可) | 水浸 |
特殊功能 | 自动补偿,针对多光子成像进行优化 | 自动补偿,针对多光子成像进行优化 |
外形尺寸 (长 x 宽 x 高) | 56 mm × 106.5 mm × 95 mm | 56 mm × 106.5 mm × 101 mm |
重量 | 约1kg | 约1kg |